尼莫地平在大鼠体内的药物代谢动力学研究

栏目分类：临床药学   发布日期：2009-12-06   浏览次数：次

作者：刘晓兰 陈钰瑛 刘惠娟

【摘要】  　　目的：探讨鼠血浆中尼莫地平血药浓度的测定及其药代动力学，建立HPLC测定鼠血浆中尼莫地平含量的方法。方法：采用药效——药代统一模型，以及HPLC测定。结果：色谱柱为Hyperil C18柱（4.6×200mm，5μm），流动相为甲醇——水（87︰13），流速1.0ml/min，柱温35℃，检测波长240nm。尼莫地平血浆在10～3200ng·ml－1范围，具有良好线性关系，Y=691C＋415，R=0.9998，提取回收率90.4%～103.0%，方法回收率97.0%～105.3%。大鼠灌胃给药10mg·kg－1，20mg·kg－1，40 mg·kg－1。血药浓度时间曲线符合一级吸收的二室模型，剂量与AUC，Tmax具有良好线性关系。结论：尼莫地平在大鼠体内的处置属于线性动力学，药物代谢动力学参数与剂量无关。本法稳定简单、可靠，可用于尼莫地平血药浓度分析及药代动力学研究。

【关键词】  高效液相色谱法 尼莫地平 血浓度 药代动力学

　　尼莫地平是一种临床上治疗脑血管疾病广泛应用的钙离子拮抗剂。本实验探讨采用高效液相色谱法测定鼠血浆中尼莫地平血药浓度，建立HPLC测定鼠血浆中尼莫地平含量的方法及其药代动力学。

    1  材料和方法

    1.1  药物、动物和仪器  药品和试剂：尼莫地平某制药厂生产，尼莫地平对照品（中国药品生物制品检定所），甲醇色谱纯，其他试剂为分析纯。动物：大鼠，体重200～250g，雌雄兼用，由省动物中心提供，给药前禁食过夜。仪器Shimadzu LC-10ADVP液相色谱仪，ShimadzuSPD-10A二极管阵列检测器，Class-VP5.2色谱工作站，Shimadzu LC-6A液相色谱仪，Waters 486可变波长检测，SR2000色谱数据工作站（上海三锐科技）。

    1.2  色谱条件  色谱柱：大连依利特Hypersil-C18柱（4.6×200mm，5μm）；流动相：甲醇——水（87︰13）；流速：1.0ml/min，柱温：35℃。测定波长240nm。

    1.3  对照品溶液的配制  取经五氧化二磷60℃真空干燥至恒重的尼莫地平对照品约10mg，精密称定至100ml量瓶中，加氯仿1.5ml溶解，流动相加至刻度，摇匀，即得浓度为100μg·ml－1的对照品溶液。精密量取0.1ml及2ml分别置10ml量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度分别为1及20μg·ml－1的对照品溶液。

    1.4  大鼠血浆中尼莫地平含量的测定  取大鼠血浆1ml加甲醇1ml，旋涡1min，加2mol· L－1碳酸钠溶液100μL，旋涡1min，加环已烷4.5ml，旋涡提取3min，4000r min－1离心10min，取上清液4ml置另一离心管中，40℃水浴中氮气挥干，进样前用150μL甲醇溶解，进样50μL，外标法以样品峰面积计算生物样品中尼莫地平浓度。

    1.5  给药剂量选择  根据预试验结果，大鼠显效剂量为22.5mg·kg－1；急性毒性试验，灌胃给药，LD50＞2.0g，故选定的试验试量为10，20，40mg·kg－1。

    1.6  大鼠药代动力学实验  实验用大鼠216只，雌雄各半，随机分成3组，每组雌雄各半，实验10，20，40mg·kg－1三个剂组，取尼莫地平适量，精密称定，用0.5%羧甲基纤维素纳配成混悬液，供大量ig给药，给药容量为2ml·100g－1。于给药0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，12，16，24，32h后不同时间大鼠股动脉取血，肝素抗凝，离心分离出血浆，－18℃冰冻保存，每一时间点用6只大鼠，分别测定各鼠的血浆药物浓度。

    2  试验结果

    2.1  按“尼莫地平血药浓度测定方法”项下操作，色谱图见图1。尼莫地平的保留时间为8.4min，内源性物质不干扰样品测定。色谱图见图1A为空白，B为体外，C为体内。

    2.2  稳定性试验 将大鼠ig给药后不同时间取样后多作的血浆混合作为稳定性试验样本，进行以下试验：①样品当日提取测定作为基础值，另将同日已提取挥干溶剂的残渣管冷藏（0℃）放置2天后测定。②样品冷冻，-20℃放置，冷冻后第一次融化，取样测定。③已融化过一次的样品再冷冻放置，冷冻一周后第二次融化，取样测定。结果表明：与基础值比较，在3种样品放置条件下，P＞0.05（α=0.02），说明血样处理吹干后，冷藏放置2天内稳定；含药血浆冷冻放置较稳定，冷冻后融化2次对样品含量无影响。